牛巨細胞病毒探針法熒光定量PCR試劑盒實驗操作:

1. 模板制備（樣本制備區(qū)）

建議使用配套水生動物病害基因組 DNA/RNA 提取試劑盒系列產(chǎn)品，具體過程詳見產(chǎn)品說明書。

2．添加模板（模板添加區(qū)，放置于冰盒中進行）

請于-20℃條件下保存，有效期 12 個月

取出所需測試數(shù)的已含有反應液 A-TSV-I 的 PCR 管，將試劑*解凍，離心 30 秒，在管蓋上標記管名（陰性對照管 NG、樣品 XX、陽性對照管 PG）。打開管蓋向各管管底分別加入 0.8μL B-I 及 0.2μL R-I，蓋上陰性對照管管蓋，其他各管分別沿管壁加入 2μL 模板，順序為待測樣品模板、PG-TSV-I，依次蓋好各管管蓋，離心 30 秒，立即進行擴增反應。

3. 擴增反應（擴增及產(chǎn)物分析區(qū)）

①恒溫儀器 63℃條件下反應 60 min。待儀器升溫至 63℃后，新建程序，設(shè)置實驗名稱及反應時間，將步驟 2中離心后的 PCR 反應管放入恒溫熒光分子檢測儀，點擊開始檢測。

②若使用熒光定量 PCR 儀，則熒光基團選擇 FAM，淬滅基團選擇 None，將 63℃ 15 s，63℃ 45 s 作為一個循環(huán)，于 63℃ 45 s 處收集熒光信號，60 個循環(huán)。

試劑使用須知：

（1）請參照相關(guān)法規(guī)、文獻、MSDS等信息，理解并掌握好試劑的特性，再進行安全操作。產(chǎn)品僅用于科研

（2）通常購買試劑時一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話，更加注意其他保管和管理。

（3）萬一試劑操作者并非專業(yè)技術(shù)人員。必須在專業(yè)人士的指導監(jiān)督下進行操作。對于使用后的廢棄物，不要或者舊的試劑，應按照相關(guān)法律法規(guī)正當處理。

（4）購買后，請務必確認標簽上的注意事項；做好預防顛倒，摔壞的措施和管理體制；在使用前再次確認標簽上的注意事項，做好必要的安全對策；對沒有標明其危害特性、有害特性的，也要慎重地進行操作；必須帶好防護用具，小心翼翼進行操作。